2022年台州医疗卫生备考：检验学《单克隆抗体如何制备》

台州中公教育 2022-01-19 15:09:02 浙江中公教育在线咨询

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2022年台州医疗卫生备考：检验学《单克隆抗体如何制备》

单克隆抗体具有性质纯、效价高、特异性强、少或无血清交叉反应、成本低和易于大量制备等优点，因此也是广泛应用于科研与临床。那么单克隆抗体究竟是如何获得的呢?以及我们事业单位考试过程中主要又有哪些考点呢?我们今天一起来学习一下吧。

单克隆抗体的制备利用的就是杂交瘤技术，基本原理就是将具有分泌特异性抗体能力的免疫小鼠脾细胞与具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞进行细胞融合，生成杂交瘤细胞，该杂交瘤细胞既具有能够分泌特异性抗体的能力，又具有能在体外生长繁殖的能力，之后将其克隆化后成为单细胞克隆，分泌的抗体即为单克隆抗体。整个过程中的具体考点如下：

操作步骤		主要考点
1	获取小鼠骨髓瘤细胞	选择与待融合的B细胞同源，为HGPRT或TK缺陷株，多选用Sp2/0细胞株。加入8-氮鸟嘌呤（8-AG）以避免返祖现象。
2	获取小鼠脾细胞	选择骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠。
3	进行细胞融合	选择细胞融合剂聚乙二醇（PEG）。
4	杂交瘤细胞的选择性培养	使用选择培养基（HAT：次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶），只有脾-瘤融合的杂交瘤细胞能够生长。
5	杂交瘤细胞的保存	加入细胞保护剂（二甲亚砜）；
5	杂交瘤细胞的保存	液氮保存（-196℃），冻存原则为慢冻快融。
6	单克隆抗体的产生	将杂交瘤细胞进行动物体内诱生法或体外培养法，之后所产生的抗体即为单克隆抗体。
7	单克隆抗体的纯化	亲和层析法。
8	单克隆抗体的性质鉴定	双扩与ELISA可鉴定其类型和效价；免疫印迹法可鉴定其特异性。