2022年台州医疗卫生备考：检验学《固相膜免疫测定》

原理

固相膜免疫测定与ELISA相类似

以微孔膜为固相载体，包被已知抗原或抗体

加入待测样本后，经微孔膜的渗滤作用或毛细管虹吸作用使标本中的抗体或抗原与膜上包被的抗原或抗体结合

通过胶体金标记物或酶标记物与之反应形成肉眼可见的显色结果

技术要点

常用的载体

膜为玻璃纤维素膜，其中最常用为NC膜

常用的标记物

胶体金标记物（常用胶体金或胶体硒）
酶标记物

分类

操作特点

斑点金免疫渗滤试验

将反应板平放于实验台面上，于小孔内滴加含待测抗原的标本1～2滴，待完全渗入，与膜上的抗体反应而结合在膜上

于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂1～2滴，待完全渗入，使胶体金标记抗体与结合在膜上的抗原反应

于小孔内滴加洗涤液2～3滴，待完全渗入，洗去未结合的胶体金标记抗体

结果观察：在膜中央有清晰的淡红色或红色斑点者判为阳性反应，反之则为阴性反应

免疫层析试验

将试剂条标记线一端浸入待测标本中2～5秒，平放于水平桌面上

结果观察：在5～20分钟内，阴性为出现1条棕红线条带；阳性为出现两2条棕红线条带；无棕红线条带出现为试剂失效

免疫印迹法

第一阶段：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。此阶段分离效果肉眼不可见

第二阶段：电转移。此阶段分离的蛋白质条带肉眼仍不可见

第三阶段：酶免疫定位。将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用后，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色